高效液相色譜（HPLC）是色譜法的一種，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。

作為實(shí)驗(yàn)室最常見的精密儀器之一，其使用頻率較高，容易出現(xiàn)各種故障，因此，小編整理了HPLC使用過程中常見的日常維護(hù)和保養(yǎng)方法，希望給用戶的日常使用提供一定的參考。

一、流動(dòng)相及樣品的制備要求

1.高效液相級(jí)色譜醇，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾，且流動(dòng)相需要定期更換。

2. 流動(dòng)相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）；

3. 樣品溶解后，用0.22微米的有機(jī)系膜或者水系膜過濾。

二、高壓恒流泵的維護(hù)和保養(yǎng)

1. 高壓恒流泵為整個(gè)色譜系統(tǒng)提供穩(wěn)定均衡的流動(dòng)相流速，保證系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行和系統(tǒng)的重現(xiàn)性。高壓輸液泵由步進(jìn)電機(jī)和柱塞等組成，高壓力長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)行回逐漸磨損泵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在升高流速的時(shí)候應(yīng)梯度升高，最好每次升高0.2mL/min，當(dāng)壓力穩(wěn)定時(shí)再升高，如此反復(fù)直到升高到所需流速。

2. 特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇或甲醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。

3．在儀器使用完了以后，要及時(shí)清洗管路并沖洗泵，保證泵的良好運(yùn)轉(zhuǎn)環(huán)境，保證泵的正常使用壽命。

三、色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)

1．所使用的流動(dòng)相均應(yīng)為HPLC級(jí)或相當(dāng)于該級(jí)別的，在配置過程中所有非HPLC級(jí)的試劑或溶液均經(jīng)0.22um薄膜過濾，而且流動(dòng)相使用前都經(jīng)過超聲儀超聲脫氣后才使用。

2．所使用的水必須是經(jīng)過蒸餾純化后再經(jīng)過0.22um水膜過濾后使用，所有試液均現(xiàn)用現(xiàn)配。并且在進(jìn)樣的樣品都必須經(jīng)過0.22um薄膜針筒過濾后進(jìn)樣。

3．所使用到的最大流速為1.0mL/min，所以流速提升過程應(yīng)是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4．儀器檢測(cè)完，需要用流動(dòng)相梯度洗脫色譜柱1小時(shí)以上。

四、工作站的維護(hù)

出現(xiàn)死機(jī)可重啟計(jì)算機(jī)；不正常運(yùn)行時(shí)，首先可更換電腦測(cè)試其硬件故障；或在本機(jī)上重新插拔接口、重新安裝軟件。